242net必赢

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min


，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠雪旺氏分离神经组织；周围神经系统中的神经胶质细胞称施万（schwann，又名雪旺细胞）细胞，它沿神经元的突起分布
。施万细胞包裹在神经纤维上，这种神经纤维叫有髓神经纤维
。有髓神经纤维和无髓神经纤维的施万细胞的形态和功能有所差异
，施万细胞的外表面有基膜，能分泌神经营养因子
，促进受损的神经元的存活及其轴突的再生，参与周围神经系统中神经纤维的构成
。施万细胞的胞核呈长卵圆形
，其长轴与轴突平行，核周有少量胞质。由于施万细胞包在轴突的外面，故又称神经膜细胞（neurilemmalcell），它的外面包有一层基膜
。施万细胞外面的一层胞膜与基膜一起往往又称神经膜（neurilemma），光镜下可见此膜。在有髓神经纤维发生中，伴随轴突一起生长的施万细胞表面凹陷成一纵沟，轴突位于纵沟内
，沟缘的胞膜相贴形成轴突系膜（mesaxon）
。轴突系膜不断伸长并反复包卷轴突，把胞质挤至细胞的内、外边缘及两端（即靠近郎氏结处），从而形成许多同心圆的螺旋膜板层，即为髓鞘。故髓鞘乃成自施万细胞的胞膜，属施万细胞的一部分。施万细胞的胞质除见于细胞的外、内边缘和两端外，还见于髓鞘板层内的施－兰切迹
。该切迹构成螺旋形的胞质通道，并与细胞外、内边缘的胞质相通。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠雪旺氏采用-胶原酶混合消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠雪旺氏经S-100免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等

。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系

，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠色胺酸羟化酶1(TPH1)检测试剂盒
，英文名

： TPH1 ELISA Kit

Mouse neonatal thyroxine (NN-T4) ELISA Kit 小鼠新生甲状腺素(NN-T4)检测试剂盒

RatMotilin,MTLELISAKit 大鼠胃动素(MTL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHABP(HumanHya]uronatebindingprotein)ELISAKit人透明质酸结合蛋白

细胞半胱蛋白酶-7(CASPASE-7)活性比色法定量检测试剂盒20次

RatVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit大鼠内脏脂肪特异性丝蛋白酶抑制剂(vaspin)检测试剂盒规格：96T/48T

CXCL12重组狗 CXCL12 / SDF-1 蛋白 Protein

NTP
，Neurual thread protein 神经丝蛋白(抗原 0.5mgNTP，Neurual thread protein 神经丝蛋白(抗原)

PTGS2重组人 PTGS2 / COX2 / PGHS-2 蛋白 Protein

DPYS Protein Human 重组人 DPYS / Dihydropyrimidinase 蛋白

PDK4 Protein Mouse 重组小鼠 PDK4 蛋白 (His & GST 标签)

NTP
，Neurual thread protein 神经丝蛋白(抗原 0.5mgNTP
，Neurual thread protein 神经丝蛋白(抗原)

DPYS Protein Human 重组人 DPYS / Dihydropyrimidinase 蛋白

CXCL12重组狗 CXCL12 / SDF-1 蛋白 Protein

PDK4 Protein Mouse 重组小鼠 PDK4 蛋白 (His & GST 标签)

PTGS2重组人 PTGS2 / COX2 / PGHS-2 蛋白 Protein

小鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human aldolase (ALD) ELISA Kit 人缩酶(ALD)检测试剂盒

Humanlipolysaccharidebindingprotein,LBPELISAKit 人脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanandrogeeceptor,AR检测试剂盒人雄激素受体(AR)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物(CO2)浓度酶偶联反应比色法定量检测试剂盒20次

MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISAKit猴载脂蛋白A1(apo-A1)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠雪旺氏细胞小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠CD30分子(CD30)ELISAKit   ELISA.   96T/48T