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细胞简介：

小鼠小梁网分离自眼球组织

；小梁网由角膜基质纤维
、后界膜和角膜内皮向后扩展而成
，覆盖在巩膜静脉窦的内侧
。小梁网细胞在眼内压调节中起着关键作用；小梁网细胞内有特定的神经递质和神经肽受体
，其中包括肾上腺素

、乙酰和神经肽Y。青光眼是由于眼内压力升高而造成的一种不可逆致盲眼病，小梁网细胞的体外培养是青光眼病因学研究的重要手段之一。在小梁网细胞中，一长串的血管活性多肽和生长因子能够触发细胞内信号传导机制，小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。形态学观察可见
，刚从组织块长出的原代细胞，形态各异
，多数呈星状或不规则形
。细胞有胞突

，核椭圆形
，胞体肥大，胞浆丰富
，且可见吞噬颗粒
。随着细胞的增生及相互融合为单层，细胞的形态趋于一致。胞浆的色素颗粒及胞突消失，排列紧密呈类似上皮细胞的扁椭圆形或不规则形。胞体透亮，包膜清晰。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠小梁网采用组织贴块法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠小梁网经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%
；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 

，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠/离子转运ATP酶α1肽(ATP1α1)检测试剂盒 ，英文名： ATP1α1 ELISA Kit

Mouse niic oxide syhase (NOS) ELISA Kit 小鼠合成酶(NOS)检测试剂盒

RatComplemefragme3a,C3aELISAKit 大鼠补体片断3a(C3a)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforP(HumanGrowthHormoneBindingProtein)ELISAKit人生长激素结合蛋白

细胞钙离子浓度比色法定量检测试剂盒20次

RatsolubleIerleukin2recepter,IL-2sRELISAKit大鼠白介素2可溶性受体(IL-2sR)检测试剂盒规格：96T/48T

EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 标签) Protein

热休克蛋白40(HSP40)重组蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 40 (HSP40)

EVI2A重组人 EVI2A 蛋白 (Fc 标签) Protein

DMBT1 Protein Human 重组人 DMBT1 / Muclin 蛋白

HA Protein Influenza B 重组乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

热休克蛋白40(HSP40)重组蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 40 (HSP40)

DMBT1 Protein Human 重组人 DMBT1 / Muclin 蛋白

EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein Influenza B 重组乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

EVI2A重组人 EVI2A 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human sphingomyelin (SM) ELISA Kit 人鞘0脂(SM)检测试剂盒

Humanmyelinprotein2,p2ELISAKit 人神经髓鞘蛋白(p2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanalpha-granularmembraneprotein,GMP-140检测试剂盒人血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)检测试剂盒规格：96T/48T

植物二(MDA)比色法定量检测试剂盒50次

MonkeyN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit猴Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠小梁网细胞小鼠核转录因子p65(mouse NF-kBp65)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠硝基酪酸(mouse Niotyrosine)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠神经肽Y(mouse NPY)   作用
：   ELISA   规格

：      进口分装

小鼠神经生长因子(mouse NGF)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。