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实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

小鼠脊髓星形胶质分离自脊髓组织
；脊髓是细细的管束状的神经结构

，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息
。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分
，在椎管里面，上端连接延髓
，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏
。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区，主要由神经细胞构成
；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成

；脊髓是许多简单反射的中枢
。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路
，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节
，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经系统基本的结构和功能单位是神经元，即神经细胞，其大小和外观在中枢神经系统中差异很大

。但都具有胞体和树突、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核
。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状，称为尼氏小体。树突和轴突是神经元的突起，能在神经元之间传递电冲动
，突起的大小和形态各不相同，很难用常规的显微镜鉴别
。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠脊髓星形胶质采用消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠脊髓星形胶质经GFAP免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠(CYCS)检测试剂盒 ，英文名： CYCS ELISA Kit

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Mouseierferon-inducibleprotein10,IP-10ELISAKit 小鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHsp-60(HumanHeatShockProtein60)ELISAKit人热休克蛋白60

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B3GALT5重组人 B3GALT5 蛋白 (Fc 标签) Protein

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HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

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小鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA 试剂盒 96T/48T

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Humanmaixexacellularphosphoglycoprotein,MEPEELISAKit 人细胞外基质0酸糖蛋白(MEPE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human6-keto-prostaglandin,6-K-PG检测试剂盒人6同前列腺素(6-K-PG)检测试剂盒规格：96T/48T

正常大鼠(SpragueDawley)肺组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-Monocyteaibody,AMAELISAKit小鼠抗单核细胞抗体(AMA)检测试剂盒规格：96T/48T

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小鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠损伤分子1(Kim-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗单核细胞抗体(AMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T