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实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

人输尿管平滑肌分离自输尿管组织；输尿管上接肾盂，下连膀胱，是一对细长的管道
，呈扁圆柱状

，位于腹膜后
，为一肌肉粘膜所组成管状结构
，沿腰大肌内侧的前方垂直下降进入骨盆
。输尿管有三个狭窄部：一个在肾盂与输尿管移行处(输尿管起始处)
；一个在越过小骨盆入口处
；后一个在进入膀胱壁的内部。这些狭窄是结石
、及坏死组织容易停留的部位。输尿管——膀胱连接处有一种特殊结构，即瓦耳代尔鞘
，它能有效地防止膀胱内尿液返流到输尿管

。临床上将输尿管分为上、中

、下三段，也可称为腹段、盆段、膀胱段
。其中，腹段自肾盂输尿管交界处，到跨越髂动脉处
；盆段，自髂动脉到膀胱壁

；膀胱段
，自膀胱壁内斜行至膀胱粘膜、输尿管开口
。输尿管管壁分为4层
，黏膜层、固有层、肌层
、外膜

。黏膜层表面为移行上皮，约有4-5层细胞；固有层由细密的结缔组织构成
，内含胶原纤维和少量弹性纤维；输尿管肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成
；外膜为疏松结缔组织，营养血管由外膜进入输尿管。输尿管有较厚的平滑肌层
，可作节律性的蠕动，使尿液不断的流入膀胱。因此对输尿管平滑肌运动的研究，是尿动力学的重要研究方向
。

方法简介：

实验室分离的人输尿管平滑肌采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人输尿管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基：基础培养基
，含FBS
、生长添加剂

、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：长梭形

传代特性：可传3-5代左右
，3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2，5%

人输尿管平滑肌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态

。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

小鼠廋素   英文名称：   Leptin   规格
：      英文缩写：   Leptin

小鼠廋素受体   英文名称
：   Leptin receptor   规格
：      英文缩写：   Leptin R

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：   leinizing hormone   规格：      英文缩写
：   LH

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：      英文缩写
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