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实验报告
：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠前列腺成纤维分离自前列腺组织；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官；前列腺是不成对的实质性器宫，由腺组织和肌组织构成。前列腺如栗子，底朝上，与膀胱相贴，尖朝下
，抵泌尿生殖膈
，前面贴耻骨联合，后面依直肠。前列腺腺体的中间有尿道穿过，扼守着尿道上口，所以，前列腺有问题时，排尿首先受影响
。前列腺是机体非常少有的
，具有内、外双重分泌功能的性分泌腺。作为外分泌腺
，前列腺每天分泌前列腺液，是构成精液主要成分
；作为内分泌腺
，前列腺分泌的激素称为“前列腺素"
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的前列腺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长

，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形
，颜色淡
。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠前列腺成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠前列腺成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2

，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

人转铁蛋白（F）试剂盒   96T/48T

人转录因子抗体-1(ATF-1)试剂盒   96T/48T

人转甲状腺素蛋白(T)试剂盒   96T/48T

人转化生长因子β2(TGFβ2)试剂盒   96T/48T

豚鼠干扰素α(IFNα)试剂盒 ，英文名： IFNα ELISA Kit

Calcium channel aibody (VGCC) ELISA Kit 人钙离子通道抗体(VGCC)试剂盒

RabbitCoisolELISAKit 兔子(Coisol)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBA(HumanBlockingaibody)ELISAKit人封闭抗体

线虫基因组DNA分离试剂盒20次

Rabbitbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit兔骨形成蛋白(BMPs)试剂盒规格：96T/48T

CD86重组大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

HSPD1重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签) Protein

IL27 Protein Human 重组人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

HDAC8 Protein Mouse 重组小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

IL27 Protein Human 重组人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

CD86重组大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HDAC8 Protein Mouse 重组小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

HSPD1重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签) Protein

大鼠前列腺成纤维细胞兔子层连蛋白/板层素(LN)ELISA 试剂盒

Human vascular endothelial cell growth factor C (VEGF-C) ELISA Kit 人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)试剂盒

Humanai-gangliosesideaibody,GM1ELISAKit 人抗抗体(GM1)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanErythropoietin,EPO试剂盒人红细胞生成素(EPO)试剂盒规格
：96T/48T

组织RSK3激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

HumanOsteogenicGrowthPeptide
，OGPELISAKit人成骨生长肽(OGP)试剂盒规格
：96T/48T