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细胞简介：

大鼠脊髓成纤维分离自脊髓组织

；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分
，在椎管里面
，上端连接延髓，两旁发出成对的神经
，分布到四肢

、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区
，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区
，主要由有髓神经纤维组成
；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官
。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来

；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的脊髓成纤维细胞呈圆形

、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长

，平坦
、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形
，颜色淡。细胞融合
，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。脊髓成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态；合成和释放细胞外基质；组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠脊髓成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脊髓成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告
：

一
、分离与培养

：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒 ，英文名
： CETP ELISA Kit

Porcine oxidized low density lipoprotein (OxLDL) ELISA Kit 猪氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试剂盒

ELISA 小鼠激活素A(mouse Activin A)  进口分装

CLIAKitforLPA(HumanL-phenylalanine)ELISAKit人苯

通用型1毫升1厘米光径塑料比色皿1个

ELISAKitALV-AG鸡白血病病毒抗原

EGF重组狗 EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 Protein

ORX-A(orexin-A 0.5mgORX-A(orexin-A) 增食欲素-A/欲激素A抗原

IFNG重组人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 Protein

CCL23 Protein Human 重组人 CCL23 / MIP 3 蛋白

FSTL1 Protein Mouse 重组小鼠 FSTL1 蛋白 (Fc 标签)

ORX-A(orexin-A 0.5mgORX-A(orexin-A) 增食欲素-A/欲激素A抗原

CCL23 Protein Human 重组人 CCL23 / MIP 3 蛋白

EGF重组狗 EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 Protein

FSTL1 Protein Mouse 重组小鼠 FSTL1 蛋白 (Fc 标签)

IFNG重组人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 Protein

小鼠游离前列腺特异性抗原(fPSA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai histone aibody (AHA) ELISA Kit 人抗组蛋白抗体(AHA)检测试剂盒

HumanNeurotensin,ELISAKit 人神经降压素()检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor8-iso-PGELISAKit大鼠8异前列腺素

异硫酸胍1公斤

Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAKit小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠脊髓成纤维细胞血管内皮生长因子受体2   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor receptor 2   规格：      英文缩写
：   VEGF-R2

血管内皮生长因子受体3   英文名称
：   vascuiar endothelial growth factor receptor 3   规格
：      英文缩写：   VEGF-R3

血管活性肠肽   英文名称：   vasoactine inestinal peptide   规格
：      英文缩写：   VIP

内脂素/内脏脂肪素   英文名称：   Visfatin   规格：      英文缩写：   Visfatin

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况
，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。