242net必赢

实验报告

：

一
、分离与培养

：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小

；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下


，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

大鼠肺小动脉内皮分离自肺小动脉组织；肺动脉干是短而粗的动脉
，自右心室的动脉圆锥起始，向左后上方斜升
，先在升主动脉根部的前面
，继而至其左侧
，至主动脉弓的下方
，约在第5胸椎高度，分为左、右肺动脉
。左肺动脉较短，横行向左
，经左主支气管前方至左肺门
，分两支进入左肺的上、下叶

。右肺动脉较长，横行向右，经主动脉升部和上腔静脉的后方达右肺门，分3支进入右肺上、中、下叶。左、右肺动脉的各分支在肺实质内又反复分支
，与支气管的分支伴行，最后达肺泡壁
，形成稠密的毛细血管网。肺动脉输送的是含二氧化碳较多的静脉血。在肺动脉干分叉处稍左侧与主动脉弓下缘之间有一结缔组织索
，称动脉韧带。管径在0.3～1mm之间，为小动脉（small-artery）
，小动脉包括粗细不等的几级分支，也属肌性动脉。较大的小动脉
，内膜有明显的内弹性膜，中膜有几层平滑肌
，外膜厚度与中膜相近
，一般没有外弹性膜
。口径在1mm以下的动脉，管壁有完整的平滑肌层及少量的弹性纤维和胶质纤维。小动脉是决定周围循环阻力大小的主要因素
，也是调节微循环灌注量的“总开关"。典型的小动脉，其管壁的厚度与管径相比约为1∶2。中膜的肌层相对比其他动脉为厚
，当平滑肌在神经支配下强力收缩时，其管腔可以闭塞，而使血液不能流入它所分布的毛细血管内，从而增加了周围血液循环的阻力。如果有许多小动脉同时收缩，可使血压显著上升。反之，当小动脉的平滑肌舒张时，则可使大量的血液流入毛细血管，外周阻力明显下降，血压降低。终末小动脉(terminal arteri-ole)的口径为20～30μm；后小动脉(metar-teriole)，又称毛细血管前小动脉(precapil-lary arteriole)的口径为12～15μm。管壁内均有较稀疏的平滑肌，在毛细血管前小动脉分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛细血管前括约肌(precapillary sphinc-ter)
，其收缩或舒张，可调节真毛细血管的血流量，是调节微循环灌注量的“分开关"。支配小动脉平滑肌的交感神经纤维
，可延伸到终末小动脉和后小动脉的平滑肌细胞。在毛细血管前括约肌上交感神经纤维特别丰富
。肺小动脉内皮细胞呈单层多角形铺路石状分布，该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质
、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。

方法简介
：

实验室分离的大鼠肺小动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法
、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠肺小动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV
、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：基础培养基
，含FBS
、EGF、bFGF
、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性
：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气

，95%；CO2
，5%

大鼠肺小动脉内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的培养状态。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况

，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)检测试剂盒

，英文名： PPAR-α ELISA Kit

Rabbit acetylcholine (ACh) ELISA Kit 兔乙酰(ACh)检测试剂盒

柯萨奇病毒A16型(CAV-16)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMMSAM(Humanmelanomametastasissurfaceadhesionmolecule)ELISAKit人黑色素瘤转移表面黏附分子

体液基质金属蛋白酶(MMP)总活性比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitFA犬

TGFB1重组狗 TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白 Protein

Nestin 巢蛋白(神经上皮干细胞蛋白 0.5mgNestin 巢蛋白(神经上皮干细胞蛋白)(抗原)

L10重组人 IL10 / Interleukin-10 蛋白 Protein

CASP3 Protein Human 重组人 CASP3 / Caspase-3 / CASP-3 蛋白

CSK Protein Mouse 重组小鼠 CSK / C-Src kinase 蛋白

Nestin 巢蛋白(神经上皮干细胞蛋白 0.5mgNestin 巢蛋白(神经上皮干细胞蛋白)(抗原)

CASP3 Protein Human 重组人 CASP3 / Caspase-3 / CASP-3 蛋白

TGFB1重组狗 TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白 Protein

CSK Protein Mouse 重组小鼠 CSK / C-Src kinase 蛋白

L10重组人 IL10 / Interleukin-10 蛋白 Protein

小鼠总蛋白(TP)检测试剂盒 96T/48T

Human ai sperm aibody (glycolipid) ELISA Kit 人抗糖脂抗体(glycolipid)检测试剂盒

HumanE1/ubiquitin-activatingenzyme,E1/UBAEELISAKit 人泛素激活酶(E1/UBAE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACEELISAKit大鼠血管紧张素转化酶

药品糖精(saccharin)含量薄层色谱法定性检测试剂盒20次

Mousepara-aminobenzoicacid,PABAELISAKit小鼠对(PABA)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠肺小动脉内皮细胞鸭免疫球蛋白E(IgE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

鸭主要组织相容性复合体(MHC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

鸭病毒性肠病毒(DEV)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

鸭白介素6(IL-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T