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使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素
。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管
，分别为 6，5
，4，3
，2 和 1 号
。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头
，下同）

。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL
，建议每次稀释 10 倍
，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）
。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中
，充分震荡 1 分钟
，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中

，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照
。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步）
，每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴
，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线

。

参数规格
：

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管
，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA
、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清
。
3. 细胞上清液

：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎
。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存
：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装
，冻存于-20℃

，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。
​
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)
，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中

，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液
，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内
。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM
。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

5-溴-3-吡甲
：188.025- -3- pyridine methanol
：37669-64-0 C6H6BrNO

2,4,6-三嘧
：125.132,4,6- three：1004-38-2 C4H7N5

3-甲戊烷3- methyl pentane
：86.18 C6H14：96-14-0

全氟辛磺酸钾
：538.22Perfluorooctanesulfonic acid potassium：2795-39-3 C8F17KO3S

聚对二甲


：Parylene：

3,4-二氯三氟甲：2153,4- two CL three：328-84-7 C7H3Cl2F3

二脲
：242.28Two phenyl urea：140-22-7 C13H14N4O； C6H5NHNHCONH

1,4-双(二氟甲)：178.121,4- bis (two f) benzene：369-54-0 C8H6F4

2,4-二-6-羟嘧：126.122,4- two hydroxy -6-：20610 C4H6N4O

猫血支原体LAMP试剂盒人 TMSB4X 基因全长ORF克隆

小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 STXBP3 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

人 Semaphorin-6A / SEMA6A 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 IL1R3 / IL1RAP 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 CD200 / OX-2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 E-Selectin / CD62e / SELE ELISA配对抗体

人 ErbB3 / HER3 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

大鼠 CLEC4A3 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 SH2D4A 基因全长ORF克隆

大鼠 HSP90AB1 基因全长ORF克隆

人 KIAA0391 基因全长ORF克隆