242net必赢

细胞简介：

软骨细胞存在于关节软骨中，负责分泌 II型胶原和其它类型的胶原以及非胶原的细胞外基质大分子。成软骨细胞的增殖和分化与脊椎动物骨架的发育有着密切的关系
。软骨细胞能分泌和响应一系列的生长因子，包括IGF-1和IL1。体外培养的软骨细胞是研究软骨修复和关节炎病理的有用模型
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的椎体终板软骨关节组织。

2）细胞鉴定
：Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)荧光染色为阳性
。

3）经鉴定细胞纯度高于90%
。

4）不含有 HIV-1
、 HBV
、HCV、支原体、
、酵母和。

5）细胞生长方式：长梭状，不规则细胞
，贴壁培养

。

推荐培养基

：

242net必赢推荐使用 DELF 原代 软骨 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和242net必赢联系，告知细胞的具体情况，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠核呼吸因子1(F1)检测试剂盒 
，英文名： F1 ELISA Kit

Rat 5 hydroxyyptamine (5-HT) ELISA Kit 大鼠5羟色胺(5-HT)检测试剂盒

RatleukoieneE4,LT-E4ELISAKit 大鼠白三烯E4(LTE4)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforeNOS-3(HumanAlpha1-Acidglycoprotein)ELISAKit人内皮型合成酶3

细胞0脂酶D2(PhospholipaseD2)水解活性比色法定量检测试剂盒20次

RatLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit大鼠白三烯C4(LTC4)检测试剂盒

LON PROTEASE重组大肠杆菌 Lon protease 蛋白 (His 标签) Protein

TNF-alpha 坏死因子-α抗原 0.5mgTNF-alpha 坏死因子-α抗原

TNK2重组人 ACK1 / TNK2 蛋白 (GST 标签) Protein

AMY2B Protein Human 重组人 AMY2B 蛋白

NGF Protein Human 重组人 β-NGF / Beta-NGF 蛋白

TNF-alpha 坏死因子-α抗原 0.5mgTNF-alpha 坏死因子-α抗原

AMY2B Protein Human 重组人 AMY2B 蛋白

LON PROTEASE重组大肠杆菌 Lon protease 蛋白 (His 标签) Protein

NGF Protein Human 重组人 β-NGF / Beta-NGF 蛋白

TNK2重组人 ACK1 / TNK2 蛋白 (GST 标签) Protein

猪干扰素γ(IFN-γ)ELISA 试剂盒

Human a disiegrin and metalloproteinase 10 (ADAM10) ELISA Kit 人解整合素样金属蛋白酶10(ADAM10)检测试剂盒

PorcineEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 猪内皮型合成酶(eNOS)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha2-PI(MouseAlpha2-plasmininhititor)ELISAKit小鼠α2纤溶酶抑制物

血液赖(lysine)含量荧光定量检测试剂盒20次

Nudemousecyclooxygenase-2,COX-2ELISAKit裸鼠环加氧酶2(COX-2)检测试剂盒

兔椎体终板软骨细胞猪白细胞间介素10   英文名称
：   Porcine Ierleukin 10   规格：      英文缩写
：   IL-10

猪白细胞间介素1β   英文名称
：   Porcine Ierleukin 1β   规格
：      英文缩写：   IL-1β

猪白细胞间介素 1   英文名称：   Porcine Ierleukin 1   规格：      英文缩写
：   IL-1

猪白细胞间介素2   英文名称
：   Porcine Ierleukin 2   规格
：      英文缩写

：   IL-2