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细胞简介
：

海马体主要负责记忆和学习
，日常生活中的短期记忆都储存在海马体中。

干细胞的研究是当前生命科学的热点

，而作为干细胞重要分支的神经干胞更以其可自我更新和增殖
、分化产生神经类神经细胞的多分化潜能

，在神经损伤修复和退行性等方面具有着巨大的应用潜势。

神经干细胞（ neural stem cell
，NSCs）的发现，为神经系统的带来了新的手段。ＮＳＣｓ是指神经系统中具有自我更新、自我增殖及多向分化潜能的一类细胞。研究表明
，胚胎、新生及成年哺乳动物的室管膜下区、海马、纹状体、中脑、臭球和脊髓等部位都存在神经干细胞
。随着ＮＳＣｓ研究的深入，离体培养的ＮＳＣｓ已经成为常用的一种的基础工具。

细胞特性：

1） 组织来源于实验动物的正常脑组织。

2) 细胞鉴定
：Nestin荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体、、酵母和
。

5) 细胞生长方式：不规则细胞
，悬浮培养
。

推荐培养基
：

242net必赢推荐使用 delf 原代 神经干 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和242net必赢联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和242net必赢联系
，告知细胞的具体情况

，以便242net必赢的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

HMGB-1ELISAKit

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泛酸激酶2抗体  Anti-PANK2

Ⅱ型胶原α1 N端前体肽抗体  Anti-procollagen type IIA

精神障碍相关GAP蛋白抗体  Anti-srGAP3

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TEC酪激酶蛋白抗体  Anti-TEC/Tec protein tyrosine kinase

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