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荚膜阿耶罗菌探针法荧光定量PCR试剂盒实验操作步骤
点击次数：696 更新时间：2022-04-12
实验操作:
1. 模板制备（样本制备区）
建议使用配套水生动物病害基因组 DNA/RNA 提取试剂盒系列产品，具体过程详见产品说明书 。
2．添加模板（模板添加区 ，放置于冰盒中进行）
请于-20℃条件下保存 ，有效期 12 个月
取出所需测试数的已含有反应液 A-TSV-I 的 PCR 管，将试剂*解冻，离心 30 秒，在管盖上标记管名（阴性对照管 NG、样品 XX、阳性对照管 PG）。打开管盖向各管管底分别加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I ，盖上阴性对照管管盖 ，其他各管分别沿管壁加入 2μL 模板，顺序为待测样品模板、PG-TSV-I ，依次盖好各管管盖 ，离心 30 秒 ，立即进行扩增反应。
3. 扩增反应（扩增及产物分析区）
①恒温仪器 63℃条件下反应 60 min。待仪器升温至 63℃后，新建程序 ，设置实验名称及反应时间，将步骤 2中离心后的 PCR 反应管放入恒温荧光分子检测仪 ，点击开始检测。
②若使用荧光定量 PCR 仪，则荧光基团选择 FAM ，淬灭基团选择 None，将 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作为一个循环，于 63℃ 45 s 处收集荧光信号，60 个循环 。